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中文名称： 鼓膜上皮干细胞特价
简称：鼓膜上皮干细胞

种属：

来源：

培养基：

状态：

产品规格：

单位：

货号：AE1360
基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到细胞鼓膜上皮干细胞特价后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。
芴甲氧羰基-L-谷酸5-叔丁酯，英文名或英文缩写：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，级别：BR，98%，规格：1克  ELISAKitTGF-β1豚鼠转化生长因子β1规格：48T/96T

(LB肉汤)  Chickengrowthhormone,GHELISAKit鸡生长激素(GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-AsparagineL-天冬素10克BR，99%  人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

脱落醋(+4℃)(见30000160) cbscisic ccid 14372-42-  小鼠催产素(OT)免疫试剂盒 Mouse oxytocin,OT ELISA Kit

香草醛 Vanillin (99%) 121-33-5 25G 通用试剂  生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG-1 ELISA Kit
葡萄糖酸铜25克  RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6ELISA试剂盒大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(丽春红)  小鼠Ⅰ型胶原N末端肽(X)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

酸钙，英文名或英文缩写：Calcium iodate，级别：AR，99%，规格：5克  Human motilin (MTL) ELISA Kit 人胃动素(MTL)ELISA试剂盒

ε-己内酯 6-Hqxcnolcctonq 20-44-3  HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGHELISAKit 人免疫反应性生长激素(irGH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

葛根素，英文名或英文缩写：Puerarin，级别：BR，粘度50 mpe.s，规格：10克  HumanCoicosterone,COELISA试剂盒人皮质同/肾上腺同(CO)ELISA试剂盒规格：96T/48T
精脒，英文名或英文缩写：Spermidine，级别：BR，98%，规格：1克  英文名称MouseMIP-5ELISAKit小鼠巨噬细胞蛋白-5(MIP-5)规格：96T/48T

HE琼脂HEKTOEN ENTERIC AGAR FOR  冰冻切片b-葡糖苷酸酶活性染色试剂盒50次

Aluminum铝丝50毫克AR，99%  Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISA试剂盒兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

均本四加醋 1,2,4,5-Bqnzqnqtqtrcccrboxylic ccid 1989-2-4  小鼠α-乳清蛋白(αLA)ELISA试剂盒 ，英文名： αLA ELISA Kit

米力农 Milrinonq 78412-7-  人白三烯E4(LTE4)ELISA检测试剂盒HumanleukoieneE4,LT-E4ELISAKit 96T/48T
鼓膜上皮干细胞特价动力-盐培养基shēng huà shì jì容量：RT25克  英文名称MousecatecholamineELISAKit小鼠儿茶酚胺(CA)规格：96T/48T

D-Galactose 25g/100g/500g INALCO原装  冰冻切片捺脂盐脂酶活性染色试剂盒50次

4-(二甲基)25克RT  RatapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒大鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格：96T/48T

姆沙伯 G HP Chromosorb G-HP  小鼠CD320分子(CD320)ELISA试剂盒 ，英文名： CD320 ELISA Kit

聚乙二醇 300 Poly(ethylene glycol) 300 (PEG 300) 25322-68-3 250ML 通用试剂  人脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA检测试剂盒Humandeoxypyridinoline,DPDELISAKit 96T/48T
操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。