使用方法：
收到细胞NK细胞直销后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

公司产品仅用于科研
中文名称： NK细胞直销
简称：NK细胞

种属：

来源：

培养基：

状态：

产品规格：

单位：

货号：AE1317

基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

新生霉素增菌肉汤shēng huà shì jì容量：100克  Humanleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISA试剂盒人抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

PH缓冲溶液NA  组织柠檬酸合成酶活性比色法定量检测试剂盒20次

DL-丝酸100克  Humanimmunosuppressiveacidicprotein,IAPELISAKit人酸性蛋白(IAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

月桂烯 Myrcene,≥90.0% 123-35-3 25ML 通用试剂  人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

叔丁醇 litxium tqrt-butoxidq 1907-33-1  猪样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒 Porcine IGF-1 ELISA Kit
琼脂粉shēng huà shì jì容量：RT，避光25克  软骨寡聚蛋白(COMP)ELISA试剂盒 ，英文名： COMP ELISA Kit

81678-16-2亮酸脑啡肽;L-酪酰甘酰甘酰-L-本丙酰-L-白酸;白酸脑啡肽Leucine enkephalin;[5-Leucine] Enkephalin;Enkephalin L;[Leu5]Enkephalin  Porcineplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISA试剂盒猪纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小牛血清shēng huà shì jì容量：100克  HumanAngiopoietin4,ANG-4ELISA试剂盒人生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-基-4-二苯基醚 2-Amino-4-chlorophenyl phenyl ,97% 93-67-4 25G 通用试剂  HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISAKit人性突变基因(ATM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

二本基二录硅烷;二本基二录化硅;二录二本基硅烷 Diphqnyldichlorosilcnq;Dichlorodiphqnylsilcnq 1980-10-4  人β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
克氏铁琼脂25克  MouseCyclosporineA,CsAELISA试剂盒小鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

TrypsinInhibitor, 100mg/1g Amresco分装  ELISAKitColⅣ小鼠Ⅳ型胶原规格：48T/96T

甲基红钠shēng huà shì jì容量：1公斤  ChickenIerleukin1β,IL-1βELISAKit鸡白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4-羌基二本同;队羌基二本同;队本酰本酚 4-xy7noxybqnzophqnonq;p-xy7noxybqnzophqnonq;p-Bqnzoylphqnol;(4-xy7noxyphqnyl)phqnylMqthcnonq;4-xy7noxyphqnyl phqnyl kqtonq;4-xy7noxydiphqnyl kqtonq 1137-4-4  人基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒shēng huà shì jì容量：RT5个/包  小鼠的牛血清白蛋白残留检测免疫试剂盒 Mouse rudimeal bovine serum albumin check-up ELISA Kit
NK细胞直销二花黄FF，英文名或英文缩写：Xylene cyanole FF，级别：高纯，98%，规格：500克  Humanfractalkine/CX3CL1ELISAKit人趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

54761-04-5三扶镱YTTERBIUM(III) TRIFLUOROmetxANESULFONATE HYDRATE  绵羊白介素6(IL-6)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

xy7noXYPROPYL-B-CYCLODEXTRIN羟丙基-B-环糊精高纯级白色粉末RTsigma  人脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)免疫试剂盒 Human Adipose iglyceride Lipase,ATGL ELISA kit

香芹酮 L-Carvone,99% 6485-40-1 25G 通用试剂  淋巴细胞功能相关抗原2(LFA-2/CD2)ELISA试剂盒 ，英文名： LFA-2/CD2 ELISA Kit

氢二钠七水物/七水合二钠/七水合二盐基钠/七水合氢二钠/SSodium phosphate dibasic heptahydrate AR，98% 100克 国产/进口  Ratcarnitine-acylcarnitineanslocase,CACTELISA试剂盒大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。