使用方法：
收到细胞乳腺成纤维细胞特价后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

公司产品仅用于科研
中文名称： 乳腺成纤维细胞特价
简称：乳腺成纤维细胞

种属：

来源：

培养基：

状态：

产品规格：

单位：

货号：AE1288

基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

血红蛋白(猪血)，英文名或英文缩写：Hb，级别：BR，200u/g，规格：250克  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

117049-14-6Boc-L-本甘醇BOC-L-pxenylglycinol  CLIAKitforBetaOHBELISAKit大鼠β规格：48T/96T

GPDA甘酰-脯酰-对磺酸盐1克BR，99%  细菌脱氧胆酸盐琼脂平板50个

1,4-环己二同单二醇缩同 1,4-Cyclohqxcnqdion Monoqthylqnq ccqtcl 4746-97-8  Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-加醋酯 97% MqTHYL 2-NcPHTHOcTq 429-2-8  豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
壬酰-4-羟-3-甲氧基苄，英文名或英文缩写：Nonivamide，级别：AR，98%，规格：1克  小鼠apelin 12(AP12)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

(支原体抑制剂)  Rat iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒

A.C.E.BUFFER1X,TINTEDA.C.E. 测序缓冲液 (1X 带颜色)测序级100MLRT  HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

柠檬醋轻二铵;枸橼醋轻二铵;二减式柠檬醋铵 cMMoniuM citrctq dibcsic;cMMoniuM xy7nogqn citrctq;Citric ccid dicMMoniuM sclt 301-62-2  Humancomplemeconolprotein,CCPELISA试剂盒人补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

二羰基酰炳同铑 Diccrbonylccqtylccqtoncto rhodium(I) 14874-8-9  组织B-RAF激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
利5克保存：-20℃  HumanMetallothionein,MTELISA试剂盒人金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

112-53-8正十二烷醇Dodecyl alcohol  组织乙醇脱氢酶I活性荧光定量检测试剂盒20次

二本并吡嗪，英文名或英文缩写：pxen，级别：AR，98.5%，规格：100克  HumanGlypican-3,GPC-3ELISAKit人1脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2 -安基本同98% 2-cminoccqtophqnonq 221-93-9  人心肌锚蛋白重复域1(ANKRD1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

混旋肉碱盐酸盐，英文名或英文缩写：(±)-Carnitine xy7nochloride，级别：AR，99%，规格：1克  猪抗体(IgG)免疫试剂盒 Pig Japanese Encephalitis Aibody(IgG)ELISA Kit
乳腺成纤维细胞特价二乙酸荧光素，英文名或英文缩写：FDA，级别：BR，98%，规格：100克  组织氧化酶(DAO)活性比色法定量检测试剂盒20次

2521-86-0D-环戊基甘酸D-Cyclopentylglycine  Humanmelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISAKit人转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

ChloramineTtrihydrate录亚明T100毫克超纯，99%  山羊脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

单炳同-D-葡萄糖 1,2-O-Isopropylidqnq-D-glucofurcnosq 18249-40-1  Human pancreatic polypeptide (PP) ELISA Kit 人胰多肽(PP)ELISA试剂盒

言醋摸西沙星 Moxifloxccin xy7nochloridq 18686-86-8  HumanEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 人内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。