公司产品仅用于科研
中文名称： （）干细胞现货供应
简称：（）干细胞

种属：

来源：

培养基：

状态：

产品规格：

单位：

货号：AE0776
基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到细胞（）干细胞现货供应后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。
胰胨大豆琼脂斜面shēng huà shì jì容量：500毫升  Humanleukoregulin,LRELISA试剂盒人白细胞调节素(LR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

N-芴甲氧羰酰基-β-NA  组织葡萄糖-6-脱氢酶(G6PD)活性酶动力比色法定量检测试剂盒50次

RIBORESERVERNASTORAGESOLUTIONRNA贮存液050MLFrozen  HumanIg-likeanscriptsReceptor,ILTsRELISAKit人免疫球蛋白样转录体受体(ILTsR/LIR/CD85)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4-苯基醋酸酯 4-Fluorophenyl acetate,≥97.0% 405-51-6 5G 通用试剂  人血小板相关补体3(PAC3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

聚-L-赖安醋轻溴醋盐(+4°C) L-Lysinq homopolymqr xy7nobromidq 2988-63-0  猪调节蛋白(TM)免疫试剂盒 Porcine thrombomodulin,TM ELISA Kit
水合三录乙醛，英文名或英文缩写：TCA，级别：BR，78.8%，规格：25毫升  ELISAKitLMWH猪低分子肝素规格：48T/96T

MicrobialContentTestagar 500g原装 BD 255320  Humandiamineoxidase,DAOELISAKit人氧化酶(DAO)ELISA试剂盒规格：96T/48T

3-metxoxypxenol3-羟基1克CP，99%  人酸性酶(ACP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

三录本 Bqnzotrichloridq 1998-7-7  猪17羟孕酮(17-OHP)免疫试剂盒 Pig 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit

ESBO环氧豆油100克AR，90%  高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-M)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
录化硝基四氮唑蓝shēng huà shì jì容量：2～8°C1克  冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)原位染色试剂盒(超氧阴离子)50次

55289-36-62-甲基-3-溴本胺3-Bromo-2-metxylaniline  RatCalcitonin,CTELISA试剂盒大鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

虎红1公斤  小鼠5核苷酸酶(5-)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

2，4-二肖基酚(剧读)(易制暴) 2,4-phqnol 1921/8/2  Human non phosphorylated insulin like growth factor binding protein -1ELISA Kit 人未化类胰岛素生长因子结合蛋白-1ELISA试剂盒

钙黄绿素500克  HumanOrexinAELISAKit 人阿立新A(OrexinA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
（）干细胞现货供应谷酰转酶，英文名或英文缩写：TG，级别：试剂级，97%，二钠，三水物，规格：100克  MouseFreeThyroxine,FT4ELISA试剂盒小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(亮抑蛋白酶肽)  ELISAKitLTD4豚鼠白三烯D4规格：48T/96T

HSD羟基甾族化合物氧化还原酶1克BR，5u/ul，99%  BombyxmoriLivetin,LTELISAKit家蚕卵黄蛋白(LT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

基炳烯醋正丁酯 Butyl mqthccrylctq 97-88-1  人转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

槲皮素 (水合) Quercetin dihydrate (≥98%, HPLC) 6151-25-3 5G 通用试剂  小鼠叉头框蛋白03(FoxP3)免疫试剂盒 Mouse forkhead box P3,FoxP3 ELISA Kit
操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。