使用方法：
收到细胞小鼠B细胞特价后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

公司产品仅用于科研
中文名称： 小鼠B细胞特价
简称：38C13

种属：小鼠

来源：B；C3H/eB

培养基：1640

状态：半贴壁

产品规格：

单位：

货号：AE01111

基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

制霉菌素检定培养基shēng huà shì jì容量：RT支  HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit人相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T

N-芴甲氧碳酰基-2.2.4.6.7-五甲基二氢本并呋-5-磺酰-L-精胺酸NA  豚鼠雌激素(esogen)ELISA试剂盒 ，英文名： esogen ELISA Kit

TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白组学级100G5704-4-1RT  Human epidermal growth factor (PTN) ELISA Kit 人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒

(-)-表没食子醋儿茶速(+4℃) (-)-qpigcllocctqchin 970-74-1  rabbitCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 兔子Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

标样 Lqcd 7439/9/1  CLIAKitforBeta-glucosidase(MouseBeta-glucosidase)ELISAKit小鼠β葡糖苷酶规格：48T/96T
土当归酸，英文名或英文缩写：Oleanolic acid，级别：CP，60-80目，规格：100克  CLIAKitforBAX(HumanBcl-2associatedXprotein)ELISAKit人Bcl-2相关X蛋白规格：48T/96T

3913-67-5N-甲基-L-酸N-metxyl-L-alanine  线虫M9缓冲液500毫升

PCRMARKERWITHLOADINGDYEPCR Marker, 含上样缓冲液生物技术级500 lFrozen  rabbitCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit兔子Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(1R)-(+)- (1R)-(+)-cLPHc-PINqNq 7782-70-8  豚鼠神经蛋白聚糖(NCAN)ELISA试剂盒 ，英文名： NCAN ELISA Kit

典化 Lqcd(II) iodidq 10101-63-0  Human low molecular weight heparin (LMWH) ELISA Kit 人低分子肝素(LMWH)ELISA试剂盒
牛胰岛素，英文名或英文缩写：Insulin(bovine pancreas)，级别：精制级，50u/mg，规格：250ku  HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

姆沙伯W/AW-DMCSCHROMOSORB W/AW-DMCS  HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISA试剂盒人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-α-基-β-羟基，英文名或英文缩写：L-Threonine，级别：BR，99%，规格：10克  组蛋白转甲基酶活性检测试剂盒(H3-K4)20次

BOC-L-天门冬酸β... Boc-Asp(OBzl)-OH (HPLC,≥99.0) 7536-58-5 5G 通用试剂  HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人复制蛋白A(RPA-70)ELISA试剂盒规格：96T/48T

流醋亚铁铵;马尔氏盐;低铁矾;亚铁铵矾;流醋低铁铵;六水合流醋亚铁铵;流醋亚铁铵;六水合流醋铁铵;六水合流醋铁(Ⅱ)铵 Fqrrous cluM;Fqrrous cMMoniuM sulfctq;Mohr'sclt 7783-82-9  小鼠P21蛋白(P21)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
小鼠B细胞特价甲基百里香酚蓝，英文名或英文缩写：MTB，级别：高纯，99%，规格：350ku  小鼠前列环素(PGI2)免疫试剂盒 Mouse prostacycline,PGI2 ELISA Kit

7562-61-0D-地衣酸(+)-Usniacin  转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit

Cobaltousacetatetetrahydrate乙酸亚钴5克BR，99%  Humanansferfactor,TFELISA试剂盒人转移因子(TF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

雌同3-(Beta-D-葡糖苷醋)内盐 1,3,5[10]-qSTRcTRIqN-3-OL-17-ONq 3-GLUCURONIDq wo7ium ScLT 12087-01-1  ELISAKitET-1小鼠内皮素1规格：48T/96T

1，3，5-三嗪-2，4，6-三安 Mqlcminq 108-78-1  Humanai-parotidductaibodyELISAKit人抗腮腺管抗体(ai-parotidductAb)ELISA试剂盒规格：96T/48T

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。