产地 | 进口、国产 |
保存条件 | 低温冷藏 |
品牌 | 帛科 |
货号 | E0932 |
用途 | 公司产品仅用于科研 |
组织来源 | 骨髓;纤维原细胞;C57BL/6J X C3H/HeJ |
细胞形态 | 详见说明书 |
是否是肿瘤细胞 | 否 |
CAS编号 | |
保质期 | 详见说明书 |
器官来源 | 详见说明书 |
免疫类型 | 详见说明书 |
品系 | 详见说明书 |
生长状态 | 贴壁 |
物种来源 | 小鼠 |
包装规格 | 瓶 |
纯度 | 详见说明书% |
是否进口 | 是 |
产品简称:M2-10B4细胞
中文名称:小鼠骨髓纤维原细胞
规格:瓶
种属:小鼠
来源:骨髓;纤维原细胞;C57BL/6J X C3H/HeJ
培养基:1640
状态:贴壁
单位:
货号:E0932
产品名称 | 规格 | 货号 |
M2-10B4细胞 | 瓶 | E0932 |
帛科细胞培养器材的选择:从培养量大小来讲,从小到大有细胞培养板、细胞反应管、摇瓶、细胞培养瓶、细胞工厂等,更大就是反应器了。
帛科细胞培养瓶培养面积从25-225平方厘米不等,一般都经过表面改性处理,适合细胞贴壁和生长。225ml 、175ml的多用于大规模培养时用(如单克隆细胞的培养等),75ml的多用于一般性细胞实验用(一般性的传代,保存细胞,为实验提供细胞等),25ml一般是用来复苏细胞或细胞较少时的培养,还有做原代细胞时也可以做多瓶而避免交叉污染。产品仅用于科研
细胞培养的具体步骤和注意事项:
1.细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中,加入37oC预热的DMEM完全培养基中(其中胎牛血清约为10%),轻轻吹匀,离心,500g离心2min,弃上清液。
加入DMEM完全培养基清洗,弃上清液。加入DMEM完全培养基,轻轻吹打混匀,制成细胞悬液,接种于培养皿/瓶中,在含5% CO2的细胞培养箱中培养。
2.细胞传代
帛科细胞密度达到80%~90%(过量不足,过晚细胞状态不佳,1:2至1:10以上的比率传代培养,一般1:3至1:5细胞一代,即从细胞接种到分离再培养的一段时间,非细胞有丝分裂次数)时,去掉完全培养基,用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以盖住细胞*,*消化温度是37oC。显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度)进行消化,放入细胞培养箱中约2-3min。
加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化,转移至离心管后500g离心2min,弃上清液,再加入DMEM完全培养基清洗,弃上清液。
加入DMEM完全培养基,轻轻吹打混匀,吸取10微升进行计数,然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。
3.细胞冻存
当细胞密度达到80%~90%时,去掉完全培养基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化,放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化,转移至离心管后500g离心2min,弃上清液,再加入DMEM完全培养基清洗,弃上清液。加入lml冻存液(90%胎牛血清,10% DMSO。
一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整,冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养,另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质,如蔗糖,白蛋白等从而更好地保护细胞),放入冻存管内(管内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入4oC冰箱中冻存30min,然后放入-20oC冰箱中冻存30min,再置于-80℃冰箱内过夜。
*天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
细胞冻存和复苏的原则是:慢冻速融,这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂,会导致细胞内冰晶的产生,从而使细胞产生内源性的机械损伤,引起细胞内环境渗透压,PH,电解质等的改变,进而促使细胞死亡。
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注意事项:
M2-10B4细胞(1)预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热;
(2)用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手;
(3)正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且减少污染;
(4)点燃酒精灯:注意火焰不能太小;
(5)严格的无菌操作;
(6)贴壁细胞消化适度:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化;
(7)传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次*只进行一种细胞的操作,每种细胞使用一套器材。避免交叉感染;
(8)传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。