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鸟源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
  • 品牌:帛科
  • 产地:进口、国产
  • 货号:BKP7419
  • 价格: ¥3800/盒
  • 发布日期: 2020-06-24
  • 更新日期: 2024-03-28
产品详请
产地 进口、国产
品牌 帛科
货号 BKP7419
用途范围 公司产品仅用于科研
纯度 详见说明书%
规格 50T
是否进口

概述:
荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。产品仅供科研使用本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNARNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

产品名称

英文名称

货号

鸟源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒


BKP7419

实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1
Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*的定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物考核、病原体检测等诸多领域。
探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:

使用方法:
一、鸟源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)
1.
注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2.
标记6个离心管,分别为765432
3.
用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.
7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.
换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.
换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.
重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8.
如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PCNC的体积也必须是200μL
9.
用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10.
如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加23倍。
11.
产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)

荧光定量PCR服务:
产品仅供科研使用简介:实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。
1
、荧光定量PCR服务要求:
01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。
02)请提供已知的全长基因序列。
03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等
2
、荧光定量PCR操作程序
01)引物(探针)设计与合成。
02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA
03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。
04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。
3
、荧光定量PCR的收费标准:
 
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
STC2 Others Human STC2 / Stanniocalcin 2 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫代基脲shēng huà shì jì容量:25

RA, 大鼠星形胶质细胞顺式屋头醋(-20) 98% CIS-cCONITIC cCID 282-84-

3T3/e细胞,小鼠成纤维细胞 白介素-2转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3/VP16-IL-2细胞 人肾系膜细胞RNAHRMC miRNA5 μg金安O cURcMINq O 462-7-

恒河猴肺细胞;RM-L1精酸琼脂糖凝胶4Bshēng huà shì jì容量:1

EPHB4 Others Human EphB4 / HTK 人细胞裂解液 (阳性对照) D- 500g/1kg/5kg/25kg原装 Sigma G8270
PECAM1 Others Human
CD31 / PECAM1 人细胞裂解液 (阳性对照) 对羟基(标准品)质量规格:供检查用4-Hydroxyphenylacetamide

小气道上皮细胞生长添加物SAEpiCGS奋乃静(标准品)质量规格:含量测定Prochlorperazine

MIF Others Human MIF / GLIF 人细胞裂解液 (阳性对照) 奋乃静质量规格:>98%,BRProchlorperazine

CRFK 猫肾上皮细胞TGX221质量规格:>98%,特异性的p110β抑制剂TGX-221

T-111B木瓜蛋白酶(100mL酶解缓冲液)10mL地奥司明质量规格:HPLC90%,BRDiosimin
ERBB4 Others Human
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 人细胞裂解液 (阳性对照) CamsylateD-樟脑-10-磺酸25BR99%

大鼠脑动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-鳞酰醇安 99%(-20) 1,2-DIMYRISTOYL-SN-GLYCqRO-3-PHOSPHOqTHcNOLcMINq 998-07-

RF/6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞 RF/6A monkey chorioretinal cells (endothelial) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS3-(N-吗啉基)-2-羌基炳磺醋 (MOPSO) MOPSO 68399-77-9

IFNA7 Protein Human 重组人 Ierferon alpha 7 / IFNA7 蛋白 (Fc 标签)BafilomycinA1fromStreptomycesgriseus巴弗洛霉素A1900U生物技术级,90%

MDA-MB-436(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 L929(成纤维细胞)1723-00-8D-派啶-2-羧酸D(+)-Pipecolinic acid
鸟源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒人非小细胞细胞;NCI-H231,4-二苯氧基苯(>98.0%(GC))1,4-Diphenoxybenzene质量规格:>98.0%(GC)

CD200R1 Others Human CD200R1 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二羧基二苯(>98.0%(GC)(T))4,4'-Dicarboxydiphenyl Ether质量规格:>98.0%(GC)(T)

家兔皮肤细胞;DR-S14-甲氧基-17β-雌二醇4-Methoxy-17β-estradiol质量规格:美国进口

FSTL5 Others Human FSTL5 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-甲酰-3,17β-O-(甲氧甲基)雌二醇2-Formyl-3,17β-O-bis(methoxymethyl)estradiol质量规格:美国进口

气管上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)17-雌二醇17-Epiestriol质量规格:美国进口
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA
模板
2
.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATPdCTPdGTPdTTP2mM
5
Taq
二、操作步骤
1
.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2
.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循环30-35次,zui后在72 保温7min
3
.结束反应,PCR产物放置于4待电泳检测或-20长期保存。
4
PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。