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牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
  • 品牌:帛科
  • 产地:进口、国产
  • 货号:BKP7420
  • 价格: ¥3800/盒
  • 发布日期: 2020-06-24
  • 更新日期: 2024-03-29
产品详请
产地 进口、国产
品牌 帛科
货号 BKP7420
用途范围 公司产品仅用于科研
纯度 详见说明书%
规格 50T
是否进口

探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:

产品名称

英文名称

货号

牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒


BKP7420

概述:
产品仅供科研使用荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNARNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1
Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*的定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物考核、病原体检测等诸多领域。

使用方法:
一、牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)
1.
注意:产品仅供科研使用由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2.
标记6个离心管,分别为765432
3.
用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.
7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.
换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.
换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.
重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8.
如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PCNC的体积也必须是200μL
9.
用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10.
如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加23倍。
11.
产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)

荧光定量PCR服务:
简介:实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。
1
、荧光定量PCR服务要求:
01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。
02)请提供已知的全长基因序列。
03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等
2
、荧光定量PCR操作程序
01)引物(探针)设计与合成。
02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA
03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。
04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。
3
、荧光定量PCR的收费标准:
 
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA
模板
2
.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATPdCTPdGTPdTTP2mM
5
Taq
二、操作步骤
1
.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2
.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循环30-35次,zui后在72 保温7min
3
.结束反应,PCR产物放置于4待电泳检测或-20长期保存。
4
PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
PC-12(
高分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12 (high differeiation) rat pheochromocytoma cells (high differeiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSFASTREDTRSALTSUBSTRATETAETS,5MG快红(片装)*白色至浅棕色F-DYEsigma

IFNA8 Protein Human 重组人 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 标签)3-派啶醇 3-Pipqridinqmqthcnol 4606-62-9

HHCC(人细胞) 5×106cells/瓶×2 粘质沙雷伯氏菌肌酸激酶测试盒100/RT

脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)chloride卤粉5BR98%

BCCIP Others Human BRCA2 / BCCIP 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N,N-二甲基价酰按N.N-DImetxYLfonmemi7e
PECAM1 Others Human
CD31 / PECAM1 人细胞裂解液 (阳性对照) 橙皮素Hesperitin质量规格:>97%,BR

人间充质干细胞-脐带青阳参苷元A(标准品)Qingyangshengenin A质量规格:HPLC98%,标准品

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 青阳参苷元B(标准品)Qingyangshengenin B质量规格:HPLC98%,标准品

人晶状体上皮细胞RNAHLEpiC miRNA5 μg4'-去甲氧基表鬼臼(标准品)4'-Demethylepipodophyllotoxin质量规格:HPLC98%,标准品

兔主动脉平滑肌细胞;CCC-SMC-1 脑神经瘤细胞,Neuro-2A细胞 SH3细胞,小鼠B细胞杂交瘤细胞去甲氧基姜黄素(标准品)Demethoxycurcumin质量规格:HPLC98%,标准品
II
型肺泡上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)L-氢录谷酸,英文名或英文缩写:L-Glutamic acid HCL,级别:BR99%,规格:100

TEK Others Cynomolgus 食蟹猴 Tie2 / TEK 人细胞裂解液 (阳性对照) 二棕榈酰-L-a-鳞脂酰醇安 1,2-DIPcLMITOYL-SN-GLYCqRO-3-PHOSPHOqTHcNOLcMINq 93-61-2

人细胞;Hela3-(N-吗啉基)-2-羌基炳磺醋内 (MOPSO-Na) MOPSO wo7ium sclt 79803-73-9

HEK-293细胞,Ad5DNA转化的胚肾细胞 恒河猴胚肾细胞,FRhK-4细胞 CL-0251MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨细胞前体细胞)5×106cells/瓶×2对二甲基偶氮本间羧酸,英文名或英文缩写:m-metxyl red,级别:BR90%,规格:10毫升

A875(人色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2551-84-8D-木酮糖.(2-8) 95%D-XYLULOSE
牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒TALL-104细胞,急性T细胞细胞 KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株,G422细胞 人成纤维细胞裂解物HLFL2-甲氧基-d3-17β-雌二醇2-Methoxy-d3-17β-estradiol质量规格:美国进口

NCI-H2170(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×23-O-甲基雌二醇-d33-O-Methyl Estradiol-d3质量规格:美国进口

Calu-1(人细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0054Calu-3()5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纤维细胞;PA3174-甲氧基-[13C,2H3]-雌激素酮4-Methoxy-[13C,2H3]-estrone质量规格:美国进口

家猫肾细胞;CATK1雌激素酮-2,4,16,16-d4 3-硫酸钠盐Estrone-2,4,16,16-d4 3-sulfate  salt质量规格:美国进口

TSPAN1 Others Human TSPAN1 (aa 110-211) 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-羟基雌激素酮2-Hydroxy Estrone质量规格:美国进口