PCR实验方法步骤：
气管比翼线虫探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：气管比翼线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Syngamus trachea
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
ARPE-19(人视网膜上皮细胞) 5×106cells/瓶×2泛影酸钠(>98%,BC)质量规格：>98%,BC diatrizoate dihydrate

CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR 人细胞裂解液 (阳性对照) 氟铝酸钠(>98%,BR)质量规格：>98%,BR fluoroaluminate

兔肾细胞;RK-13马尿酸钠(>98%,BR)质量规格：>98%,BR hippurate

IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 钠(>95%,BR)质量规格：>95%,BR laurate

Ishikawa 人细胞吡嗪(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)Pyrazine
非洲绿猴肾细胞;VERO C1008 (E6) 中国仓鼠肺细胞，V79细胞 HCCC-9810(胆管细胞型细胞)分子筛, 5 ?(干燥剂用)质量规格：干燥剂用Molecular sieves, 5 ?

EB病毒转化的人B细胞;KMY1008分子筛, 5 ?(pellets,3-5 mm)质量规格：pellets,3-5 mmMolecular sieves, 5 ?

CD27 Others Mouse 小鼠 CD27 / TNFRSF7 人细胞裂解液 (阳性对照) 格列齐特质量规格：>95%,BRGliclazide

CM-R029大鼠肠平滑肌细胞完全培养基100mL格列齐特（标准品）质量规格：HPLC>95%,标准品Gliclazide

CDH18 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 人细胞裂解液 (阳性对照) 格列本脲质量规格：>99%,BRGlyburide/Gliebenclamide
大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1) 细胞，SHG-44细胞 W6/32细胞，小鼠B细胞杂交瘤细胞P-DImetxYLAMINOCINNAMALDEHYDE对二甲基肉桂醛*橙棕色粉末FRZsigma

Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞细胞 Mouse苯芴酮 Phenylfluorone,978 975-17-7 25G 通用试剂

CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人细胞裂解液 (阳性对照) 格拉司琼相关物质B Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound B;N-[(1R,3r,5S)-9-Mqthyl-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-1H-indczolq-3-ccrboxcMidq 107007-92-4

成纤维细胞培养基-2FM-2-prfGly-Vlu甘酰-L-缬酸1克BR，98%

PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人细胞裂解液 (阳性对照) 112-34-5二乙二醇一丁;二乙二醇丁;二羟二;丁基卡别妥尔;二甘醇一丁;2-(2-丁氧基乙氧基)乙醇;二乙二醇单丁Dietxylene glycol Monobutyl ;Butyl digol;Butyl diicinol;2-(2-Butoxyethoxy)ethanol
气管比翼线虫探针法荧光定量PCR试剂盒青霉素/链霉素溶液P/SL-脯氨酰胺L-Prolinamide质量规格：0.98

VEGFA Others Canine 狗 VEGF / VEGFA 人细胞裂解液 (阳性对照) L-谷氨酸(标准品)L-Glutamic acid质量规格：>99%(TLC)，标准品

人急性T细胞细胞;Jurkat, Clone E6-1L-谷氨酸(sigma)L-Glutamic acid质量规格：>99%,Sigma分装

H7402细胞，人细胞 小鼠艾氏腹水癌细胞,EAC细胞 非洲绿猴肾细胞;VERO-76DL-谷氨酸DL-Glutamic acid monohydrate质量规格：>98%,水合物

MGC80-3(人细胞) 5×106cells/瓶×2肌氨酸Sarcosine 质量规格：>99%,BR

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。