产地 | 进口、国产 |
品牌 | 帛科 |
货号 | BKP7192 |
用途 | 公司产品仅用于科研 |
包装规格 | 50T |
纯度 | 详见说明书% |
CAS编号 | |
是否进口 | 是 |
探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
粘质沙雷菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | Serratia marcescens | BKP7192 |
概述:
产品仅供科研使用荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*的定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物考核、病原体检测等诸多领域。
使用方法:
一、粘质沙雷菌探针法荧光定量PCR试剂盒稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:产品仅供科研使用由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
荧光定量PCR服务:
简介:实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求:
(01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。
(02)请提供已知的全长基因序列。
(03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
(01)引物(探针)设计与合成。
(02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。
(03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。
(04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准:
我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
B16BL6细胞,小鼠色素瘤细胞 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞) EB病毒转化的人B细胞;KM932人参皂甙Rb2,英文名或英文缩写:Ginsenoside Rb2,级别:AR,99.5%,规格:100克
CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 标签)邻甲基对苯盐 2,5-Diamino sulfate,97% 615-50-9 25G 通用试剂
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人细胞裂解液 (阳性对照) 过氧化月桂酰; Lcuroyl pqroxidq;Dodqccnoyl pqroxidq;clpqrox C; 102-74-8
人耐VP16绒癌细胞株;JEG-3/VP16片shēng huà shì jì容量:25克
CD68 Others Human 人 CD68 / Macrosialin / Gp110 (aa 1-319) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 红 3BNA
人肝窦内皮细胞 (HHSEC) ( 5×105 )四己基化铵(>98.0%(T))质量规格:>98.0%(T)Tetrahexylammonium Iodide
CL-0067COLO 320(人细胞)5×106cells/瓶×2四戊基化铵(>98.0%(T))质量规格:>98.0%(T)Tetraamylammonium Iodide
小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3 大鼠牙细胞完全培养基 100mL四庚基化铵(>98.0%(T))质量规格:>98.0%(T)Tetraheptylammonium Iodide
LOVO/Adr 阿霉素耐药株四苯基化膦(>97.0%(T))质量规格:>97.0%(T)Tetraphenylphosphonium Iodide
EML1 Others Human 人 EML1 / TLT-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 四苯硼钠质量规格:AR tetraphenylboron
大鼠脑脊神经元RN-rL-乳酸钙,英文名或英文缩写:Calcium Lactate,级别:BR,98%,规格:150U
MICA Others Human 人 MICA 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,2-环氧忻烷 (S)-1,2-qPOXYOCTcNq 20418-68-3
HES 人胚皮肤成纤维样细胞录化溶菌酶(+4℃) Lysozymq xy7nochloridq 9066-29-2
CM-R051大鼠子宫颈上皮细胞完全培养基100mL酸,英文名或英文缩写:Glyoxylic acid,级别:AR,98%,规格:25克
AGS人胃腺癌细胞5994-61-6N-(膦酰甲基)亚基二乙酸N-(Carboxymetxyl)-N-(phosphonometxyl)-glycine
粘质沙雷菌探针法荧光定量PCR试剂盒中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1 腺癌细胞,SK-BR-3细胞 RK-13细胞,兔肾细胞系DL-胱氨酸DL-Cystine质量规格:0.98
SGC-7901, 人胃腺癌细胞系 HumanN-氧基曲唑酮Trazodone N-Oxide质量规格:美国进口
CPB2 Others Human 人 CPB2 / Carboxypeptidase-B2 人细胞裂解液 (阳性对照) 4'-羟基盐酸曲唑酮4'-Hydroxy Trazodone HCl质量规格:美国进口
人表皮角质细胞-裂解物HEK-a L盐酸伐伦克林标记15N3Varenicline Hydrochloride Labeled 15N3质量规格:美国进口
HK3 Others Human 人 Hexokinase-3 / HK3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 内酰胺伐伦克林Varenicline Lactam质量规格:美国进口