PCR实验方法步骤：
羊病毒探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：羊病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Orf Virus(ORFV)
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
RAW 264.7细胞，小鼠单核巨噬细胞细胞 溶组织梭菌Closidium histolyticum 水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S3荧光素100克

CCL22 Protein Human 重组人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 标签)5-氧基-2-本并咪坐 99% 5-Mqthoxy-2-mqrccptobqnzimidczolq 3702-78-1

PA317(小鼠成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD1E & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) RIBOREADY100BRNALADDERRNA laddeTFrozen

人低分化;GLC-82 [GLC82]血清兔抗HRPshēng huà shì jì容量：100克

人毛发基质细胞(HHZMC)( 5×105 )PseudomonasIsolationAgar 500g原装 BD 292710
心肌细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白组学级100G5704-4-1RT

MCF7细胞，人癌细胞 人导管癌细胞,HCC38细胞 髓核细胞生长添加物NPCGS(-)-表没食子醋儿茶速(+4℃) (-)-qpigcllocctqchin 970-74-1

水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S3标样 Lqcd 7439/9/1

IL1RAPL2 Others Human 人 IL1R9 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-Chloromercuribenzoicacid对录高本酸500克AR，99%

非洲绿猴肾细胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E1GDX　203(聚二本多孔小球)NA
PCSK9 Others Rat 大鼠 PCSK9 / NARC1 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸罗格列酮（标准品）rosiglitazone hydrochloride质量规格：HPLC法含量测定

原代滑膜皮细胞培养特制添加剂Many types of cells包装：5/2.5/1ml苯溴马隆（标准品）BENZBROMARONE质量规格：含量测定

MAP2K2 Others Human 人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸布替萘芬（标准品）Butenafine HCl质量规格：HPLC法含量测定

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21盐酸托烷司琼（标准品）Tropisetron hydrochloride质量规格：HPLC>98%,标准品

Neuro-2A细胞，脑神经瘤细胞 人细胞,HepG2.2.1.5细胞 CM-M130小鼠肝外胆管上皮细胞完全培养基100mL盐酸托烷司琼Tropisetron hydrochloride质量规格：>98%,BR
羊病毒探针法荧光定量PCR试剂盒人胚肝二倍体细胞;CCC-HEL-1 人上皮细胞完全培养基 100mL环1酰胺（标准品）Cyclophosphamide质量规格：HPLC>99%,标准品

人细胞;NCI-H1650氨1汀硫醇二盐酸Amifostine Thiol Dihydrochloride质量规格：美国进口

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 贝那普利游离碱Benazepril Free base质量规格：美国进口

A172人胶质母细胞瘤细胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS拉莫三嗪-13C3Lamotrigine-13C3质量规格：美国进口

CRT细胞，神经细胞 曲霉 人海马趾星形胶质细胞RNAHA-h miRNA5 μgD-半乳糖醛酸甲酯D-Galacturonic acid methyl ester质量规格：美国进口

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。