PCR实验方法步骤：
支原体探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：支原体探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Mycoplasma pneumoniae
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
CALR Others Human 人 CALR / Calreticulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 虎红1公斤

脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2，4-二肖基酚(剧读)(易制暴) 2,4-phqnol 1921/8/2

CA46细胞，人Butts瘤细胞系 小鼠Lewis瘤株,LLT细胞 人肝脏星形细胞裂解物HHSteCL钙黄绿素500克

NCI-H295R(人肾上腺皮质腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2葡萄糖酸盐，英文名或英文缩写： gluconate，级别：BR，土豆来源，规格：10克

CCRF-CEM(人急性细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0094HCC827(人非小细胞细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠树突状细胞低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);DG6-GFP硅酮　OV-61Silicone OV-61
大鼠骨骼肌细胞完全培养基 100mLM-肉汤shēng huà shì jì容量：500克

208F大鼠成纤维细胞 208F rat fibroblasts 大鼠成纤维细胞2′-脱氧胞苷-5′-... 2′-Deoxycytidine 5′-triphosphate dis... 102783-51-7 25MG 通用试剂

IFNA8 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 标签)六二醇 Hqxcqthylqnq glycol 612-12-8

IAR20(大鼠肝细胞) 5×106cells/瓶×2 啤酒酵母液体硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂)100克

肝动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)蛋白胨水培养基Peptone Water Medium
CD300C Others Human 人 CD300C / CMRF-35 / IGSF16 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸左西替利嗪Levoceitrizine HCl质量规格：>99%,BR

杂交瘤(B类);Z172A4C4C6F3G12盐酸西替利嗪（标准品）Cetirizine Hydrochloride质量规格：含量测定

KIRREL3 Others Rat 大鼠 KIRREL3 / NEPH2 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸雷莫司琼（标准品）Ramosetron hydrochloride质量规格：含量测定

肠内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)*度酸（标准品）Etodolac质量规格：含量测定

HCPEpiC细胞，人脉络丛上皮细胞 小鼠瘤细胞,Nb2-11细胞 人前脂肪细胞-皮下cDNAHPA-s cDNA（标准品）Amfebutamone Hydrochloride质量规格：含量测定
支原体探针法荧光定量PCR试剂盒AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人细胞裂解液 (阳性对照) 苯（标准品）Benzaldehyde质量规格：含量测定

人骨骼肌成肌细胞总RNAHSkMM NA卡维丁（标准品）Cavidine质量规格：含量测定

HSPA1A Others Human 人 HSP70 / HSPA1A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 5-羟色胺盐酸盐（标准品）Serotonin hydrochloride 质量规格：含量测定

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A月见草油（标准品）Evening primrose oil质量规格：鉴别

NCI-H446[H446]细胞，小细胞细胞 人癌细胞系,ZR-75-30细胞 615小鼠T细胞性瘤株;L7712龙血素A（标准品）Loureirin A 质量规格：含量测定

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。