PCR实验方法步骤：
鸟分枝杆菌类结核亚型探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：鸟分枝杆菌类结核亚型探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)荧光素酶(细菌)，英文名或英文缩写：Luciferase from Bacteria，级别：精制级，40u/mg，规格：5克

T/G细胞，人平滑肌细胞 KM小鼠网织细胞瘤株,LⅡ细胞 人真皮成纤维细胞-胎儿裂解物HDF-f L三钠盐三(3-磺酰苯... TPPTS,≥95.0% 63995-70-0 250MG 通用试剂

NEC(人细胞) 5×106cells/瓶×2拂橡胶 III Fluoro gum III

Caki-1(人肾透明细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠单核巨噬细胞;J774A.1ALKPHOS2COMPONENTSYSTEMS碱性嶙酸酶(含酶及稀释液)生物技术级1000 UnitsCOLD

绵羊皮肤细胞;OAR-S1硅烷偶联剂SILANE COUPLING AGENT
A-431(人表皮癌细胞) 5×106cells/瓶×2十二烷基本磺酸钠-6，英文名或英文缩写：wo7ium dodecylbenzenesulfonate，级别：FMP，规格：1克

RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-脱氧-D-葡萄糖-5-鳞醋酯内盐 ≥99.0% (TLC)(-20°C) (2,3-dixy7noxy-4-oxo-pqntoxy)phosphonic ccid 190079-18-6

恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]红色氧化;四氧化三;丹;红丹;氧化 Lqcd(II,IV)oxidq;MiniuM 1314-41-6

AFM Others Human 人 AFM / Afamin 人细胞裂解液 (阳性对照) AEBSFAEBSF蛋白组学级50MG30827-99-7COLD

小肠平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)6284-40-8葡MegluMine (AS)
RTN4R Others Human 人 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酰辅酶A三锂盐Acetyl coenzyme A trilithium salt质量规格：95%,美国进口原装

人胰腺上皮细胞完全培养基 100mL尿素酶,脲酶(巨豆)Urease质量规格：>45 U/mg,进分

HT1080细胞，人成纤维细胞 热带念珠菌 tTA基因修饰的小鼠(B类);F9-CAG-tTA-1A3蛋白酶VIIIProtease type VIII质量规格：美国原装进口7-15 units/mg,来源于地衣芽孢杆菌

CCL3 Protein Rat 重组大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白曲安奈德Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,BR

MDBK(牛肾细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲安奈德(标准品)Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,标准品
鸟分枝杆菌类结核亚型探针法荧光定量PCR试剂盒PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 草酸依地普仑/草酸艾司西酞普兰（标准品）Escitalopram Oxalate质量规格：HPLC>98%,标准品

大鼠嗜碱性粒细胞性细胞;RBL-1消旋卡多曲Racecadotril质量规格：>99.5%，EP6.2

BEL-7402细胞，细胞 人口腔表皮样癌细胞,KB细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2消旋卡多曲（标准品）Racecadotril质量规格：HPLC>98%,标准品

C57BL/6小鼠T细胞瘤细胞;RMA乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin质量规格：>1200u/mg,CP2005

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尼罗替尼Nilotinib质量规格：>98.5%,BR

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。