PCR实验方法步骤：
李斯特菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：李斯特菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Listeria spp.
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
豚鼠心肌细胞;GP-H1曲拉通x-1145克2～8℃

3T6-Swiss albino细胞，胚胎成纤维细胞 人细胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞 CM-M040小鼠肝窦内皮细胞完全培养基100mL缩水甘油三基录化铵(+4℃) 2,3-qpoxypropyltrimqthylcmmonium chloridq 3033-77-0

正常大鼠肾细胞;NRK对本100毫克

CDH6 Others Human 人 CDH6 / KCAD 人细胞裂解液 (阳性对照) 三号胆盐5克RT，避光

人脉络丛成纤维细胞cDNAHCPF cDNA2-脱氧胞苷-5-三1酸钠盐(+4℃)NA
HNE1细胞，人细胞 小鼠细胞,FO细胞 CM-H006人肺动脉成纤维细胞完全培养基100mLAGAROSEI/TAEBLEND1.5%琼脂糖 - TAE 混合物 1.5%生物技术级50GRT

NCI-H292(人细胞) 5×106cells/瓶×2(1S 2S 3R 5S)-(+)-蒎烷二醇 99% (1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-Pincnqdiol 18680-7-8

Promocell C-26001 Renal Epithelial Cell GrowthMedium , 肾上皮细胞生长培养基(即用型) 500ml流化 LqcD(II) SULFIDq 1314-87-0

间充质干细胞培养基MSCM-acf-prfGlyceroltrioleate甘油三油酸醋5克BR，97%

PTPN2 Others Human 人 PTPN2 / TC-PTP (aa 1-314) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 120-83-22,4-二录酚2,4-Dichloropxenol
猪内皮细胞;ZYM-SVEC01远志口山酮；远志山酮IIIPolygalaxanthone III质量规格：HPLC≥98%，标准品

CCDC134 Others Human 人 CCDC134 人细胞裂解液 (阳性对照) 雷公藤定碱Wtlfordine质量规格：HPLC≥98%，标准品

透明质酸酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL三正丁基十四烷基氯化膦Tributyltetradecylphosphonium chloride质量规格：50%grade

BGC-823人胃腺癌细胞(低分化) BGC-823 human gasic cancer cells (poorly differeiated) 1640+10% FBS罗汉果皂苷ⅢA1mogroside ⅢA1 质量规格：HPLC≥98%，标准品

IL4 Protein Human 重组人 IL4 / Ierleukin-4 蛋白罗汉果皂苷ⅡA2mogroside II A2质量规格：HPLC≥98%，标准品
李斯特菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒人巨细胞细胞株;Mo7e胆甲基碳酸酯(>80.0%(GC))Cholesterol Methyl Carbonate质量规格：>80.0%(GC)

TNFRSF1B Others Human 人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B (aa 1-268, 196 Met/Arg) 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))Cholesterol Ethyl Carbonate质量规格：>94.0%(GC)

mCF, 小鼠成纤维细胞胆异丙基碳酸酯(>95.0%(GC))Cholesterol Isopropyl Carbonate质量规格：>95.0%(GC)

NIH3T3细胞，NIH SWISS小鼠胚细胞 人细胞,ALVA细胞 人主动脉平滑肌细胞RNAHASMC miRNA5 μg胆丁基碳酸酯Cholesterol Butyl Carbonate质量规格：

恒河猴肾细胞;RM-2胆异丁基碳酸酯Cholesterol Isobutyl Carbonate质量规格：

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。