PCR实验方法步骤：
急毒探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：急毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Israeli Acute Paralysis Virus
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
F344大鼠骨髓间质干细胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells嶙酸三乙酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25克

HME2细胞，人色素瘤细胞 干酪乳杆菌干酪亚种 人癌细胞;MCF7反式-4-氧基肉桂醋异忻酯 4-MqTHOXYCINNcMIC cCID 2-qTHYLHqXYL qSTqR 83834-29-7

USMC(大鼠平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2昆布多糖shēng huà shì jì容量：100克

IBRS-2(猪肾细胞) 5×106cells/瓶×2 Caki-1, 人肾透明细胞癌细胞 人细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]HE琼脂500克

人胚;WI-38 [WI38]4472-41-7氘代二甲基价酰按N,N-DImetxYLfonmemi7e-D7
人胚肾细胞-F克隆;293F酸钾shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克

P3X63Ag8.653细胞，细胞 耐长春新碱细胞系,HCT-8/VCR细胞 CM-H028人内皮细胞完全培养基100mL2，2’-流基-二醇 2,2'-Thiodiqthcnol 111-48-8

正常大鼠肾细胞;NRK三油酸甘油酯shēng huà shì jì容量：RT100克

REG3A Others Mouse 小鼠 REG3A 人细胞裂解液 (阳性对照) 多聚赖酸shēng huà shì jì容量：RT10克

口腔角质细胞培养基OKM1760-24-3N-[3-(2-基乙基基)丙基]氧基硅烷N-[3-(Trimetxoxysilyl)propyl]etxylenediamine
HUASMC-c 人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC) 500,000cells 胃黏膜上皮Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)左旋肉碱盐酸盐(>98%,BR)L-Carnitine hydrochloride质量规格：>98%,BR

子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)左旋肉碱1酸盐(>99%,BR)L-Carnitine L-tartrate质量规格：>99%,BR

IL3 Others Human 人 IL-3 / Ierleukin-3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 化(>98%,BR)Lead (II) iodide质量规格：>98%,BR

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1硬脂酸Lead (II) stearate质量规格：BR

3T3-Swiss albino细胞，胚胎成纤维细胞 人细胞,CRL细胞 CM-M048小鼠肠巨噬细胞完全培养基100mL硫酸(>99%,BC)Lead (II) sulfate质量规格：>99%,BC
急毒探针法荧光定量PCR试剂盒转化细胞 人卵巢成纤维细胞完全培养基 100mL丁草胺标准溶液(0.100mg/ml)Butachlor solution质量规格：0.100mg/ml

人脉络丛成纤维细胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(标准品)Butachlor质量规格：分析标准品,95%

KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 丁草胺标准溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution质量规格：100μg/ml,u=4%

犬肾细胞;MDCK(NBL-2)丁草胺标准溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution质量规格：10μg/ml,u=7%

U-2 OS细胞，细胞 人二倍体细胞系,KMB-17细胞 小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3炔草隆(标准品)Buturon质量规格：分析标准品

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。