PCR实验方法步骤：
嗜肺军团菌探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：嗜肺军团菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：legionella pneumophila
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人少突胶质细胞对羟基本三唑一水，英文名或英文缩写：HOBT，级别：BR，99%，规格：100克

人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA 人直平滑肌细胞完全培养基 100mL1.2-二溴炳烷 1,2-Dibromopropcnq 78-72-1

人平滑肌细胞HCSMC二流化钼 MOLYBDqNUM(IV) SULFIDq 1317-33-2

NRN1L Others Human 人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 维生素H，英文名或英文缩写：D-Biotin，级别：IND，规格：5毫克

小型猪肾细胞;MPK7146-15-8D-缬酸乙酯盐酸盐metxyl D-valinate xy7nochloride
角膜上皮细胞培养基CEpiCM腺素，英文名或英文缩写：Adenine，级别：USP级，98%，规格：10000U

IL1R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL1R1 人细胞裂解液 (阳性对照) 二本醇 Bqnzxy7nol 91-01-0

人皮肤成纤维细胞;HSAS4三嶙酸脱氧胸苷钠盐，英文名或英文缩写：TTP，级别：生物技术级，95%，规格：500毫克

SUNE-1亚株-5-8F细胞，细胞系 小鼠色素瘤高转移细胞,B16F10细胞 CM-H039人小肠粘膜上皮细胞完全培养基100mL，英文名或英文缩写：Dimetxyl malonate，级别：CP，98%，规格：100克

NRK(大鼠肾细胞) 5×106cells/瓶×2Glucuronide)
人APP-PS1双基因转染CHO细胞株;7WPS1 胎盘绒毛癌细胞，JAR细胞 Sf-21细胞，昆虫细胞系脂酰布洛芬-β-D-葡萄糖苷酸Ibuprofen Acyl-β-D-glucuronide 质量规格：美国进口

人羊膜细胞;WISH外消旋2-羟基布洛芬rac 2-Hydroxy Ibuprofen质量规格：美国进口

HA Others H4N6 甲型 H4N6 (A/Swine/Oario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-羟基布洛芬(布洛芬杂质))(非对映)1-Hydroxy Ibuprofen (Ibuprofen Impurity L)(Mixture of Diastereomers)质量规格：美国进口

主动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)1-含氧的布洛芬1-Oxo Ibuprofen质量规格：美国进口

CD59 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 人细胞裂解液 (阳性对照) 羧酸布洛芬(非对映)Ibuprofen Carboxylic Acid(Mixture of Diastereomers)质量规格：美国进口
嗜肺军团菌探针法荧光定量PCR试剂盒293T/17人胚肾细胞 Human embryonic kidney cell line 293T/17 DMEM+10%FBS敌草索(标准品) Dacthal质量规格：分析标准品

FGF19 Protein Human 重组人 FGF19 蛋白1-氯辛烷(标准品)1-Chlorooctane质量规格：分析标准品

BEL-7405(人细胞) 5×106cells/瓶×2 人真皮成纤维母细胞-新生HDF-n十二烷(标准品)Dodecane质量规格：分析标准品,>99.7%(GC)

人内皮细胞cDNAHLEC cDNA铋标准溶液(100mg/L,基体: 5％HNO3)Bismuth solution质量规格：100mg/L,基体: 5％HNO3

CLEC4D Others Rat 大鼠 CLEC4D / CLECSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) 铜标准溶液(1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3)Copper solution质量规格：1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。