人Tamm-Horsfall蛋白ELISA试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
纤维二糖多粘菌素E(CC)琼脂基础冻干配套试剂
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础 冻干配套试剂
多粘菌素B(氯化钠多粘菌素B肉汤冻干配套试剂)
亚碲酸钾(庆大霉素琼脂冻干配套试剂)
亚碲酸钾(四号琼脂冻干配套试剂)
改良纤维二糖多粘菌素B多粘菌素E(mCPC)琼脂基础
3%氯化钠三糖铁琼脂
Cary-Blair氏运送培养基(不含琼脂)
Cary-Blair氏运送培养基
氯化钠多粘菌素B肉汤基础
60g/L氯化钠蛋白胨水(PW)
庆大霉素琼脂
3%氯化钠溶液
我妻氏血琼脂
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
碱性琼脂
四号琼脂
TCBS琼脂
缓冲-甘油氯化钠溶液
3%氯化钠碱性蛋白胨水
碱性蛋白胨水
SCDLP液体培养基
营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)
含铁牛奶培养基
亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂基础(SPS)