磷酸化转录因子SOX9蛋白抗体的生物素化标记实验要点:
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
AGPHD1 氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体
ASGPR1 唾液酸糖蛋白受体1抗体
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗体
AKAP5 A激酶锚定蛋白5抗体
ATXN3L 小脑脊髓共济失调蛋白3抗体
ASTE1 ASTE1蛋白抗体
phospho-APG4B(Ser309) 磷酸化自噬相关蛋白4B抗体
AFAP 微丝相关蛋白1抗体
ADORA1 腺苷A1A受体抗体
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗体
ABAT γ氨基丁酸转氨酶抗体
A2BP1 共济失调蛋白2结合蛋白1抗体
ADAM17 肿瘤坏死因子α转换酶
ARNT2 芳香烃受体核转录蛋白2抗体
ABH8 AlkB同源蛋白8抗体
ABI3BP ABI基因家族成员3结合蛋白抗体
ARHGAP20 Rho GTP酶激活蛋白20抗体
ASB10 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族10抗体
ALDH1L1 乙醛脱氢酶1蛋白家族L1抗体
Axin 2 轴抑制蛋白2抗体
ANGPTL6 血管生成素相关蛋白6抗体
AMH Muellerian缪勒管激素抑制因子抗体
EphA8 酪氨酸蛋白激酶受体A8抗体
Acetoacetyl-CoA synthetase 脂肪酰辅酶A家族成员1抗体
ARNTL2 芳香烃受体核转录蛋白样2抗体
phospho-AANAT (Thr29) 磷酸化芳香胺N-乙酰化转移酶抗体
ABLIM1 肌动蛋白结合蛋白1抗体
AMIGO2 粘附分子IgG样结构域蛋白2抗体