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植物总蛋白质微量提取试剂盒实验步骤

植物总蛋白质微量提取试剂盒实验步骤

2021-11-19

植物总蛋白质微量提取试剂盒实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

HCT-8(人盲肠腺癌细胞)
HEC-1-A(人子宫内膜腺癌细胞)
HEC-1-B(人子宫内膜腺癌细胞)
Hela(人宫颈癌细胞)
Hep 3B(人肝癌细胞)
Hep G2(人肝癌细胞)
HEp-2(人喉表皮样癌细胞)
Hepa 1-6(小鼠肝癌细胞)
HFL1(人肺成纤维细胞)
HGC-27(人胃癌细胞)
HIC(人小肠癌细胞)
HK-2(人肾小管上皮细胞)
HL-60(人早幼粒急性白血病细胞)
HL-7702(人肝正常细胞)
HMy2.CIR(人B淋巴母细胞)
HO-8910(人卵巢癌细胞)
Hs 578T(人乳腺癌细胞)
Hs 746T(人胃癌细胞)
HSC-T6(大鼠肝星形细胞)
HT-1080(人纤维肉瘤细胞)
HT-29(人结肠癌细胞)
HuH-6(人肝母细胞瘤细胞)
HuH-7(人肝癌细胞)
Hut-102(人皮肤T淋巴瘤细胞)
HUVEC(HUV-EC-C) (人脐静脉血管内皮细胞)
IBRS-2(猪肾细胞)
IMR-32(人神经母细胞瘤细胞)
J82(人膀胱癌细胞)
JAR(人胎盘绒毛膜癌细胞)
JEG-3(人绒毛膜癌细胞)
JeKo-1(人套细胞淋巴瘤细胞)
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴细胞白血病细胞)
K-562(人慢性骨髓性白血病细胞)
KB(人口腔表皮样癌细胞)
KG-1(人急性骨髓性白血病细胞)
KLE(人子宫内膜癌细胞)
KU812(人外周血嗜碱性白血病细胞)
L1210(小鼠白血病细胞)
L6(大鼠成肌细胞)
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纤维
Lec1(仓鼠卵巢细胞)
Li-7(人肝癌细胞)